高良姜、大高良姜、紅豆蔻、草豆蔻、益智均為姜科 山姜屬（Alpinia）中藥，其中高良姜為高良姜（Alpinia officinarum Hance）的干燥根，大高良姜、紅豆蔻分別為大 高良姜（Alpinia galangal Willd.）的干燥根莖和果實(shí)，草 豆蔻為草豆蔻（Alpinia katsumadai Hayata）的干燥近成 熟種子，益智為益智（Alpiniae oxyphylla Miq.）的干燥成 熟果實(shí)。這5味中藥的植物親緣關(guān)系密切，皆收載于《中 華本草》，且高良姜、紅豆蔻、草豆蔻、益智收載于2015 年版《中國藥典》（一部）。

1 材料

1.1 儀器

Epoch 型全自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國 BioTek 公司）；DNP9162型電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）； HVE-50型自動(dòng)高壓滅菌器（日本Hirayama公司）；PGL16型冷凍離心機(jī)（湖南賽特湘儀離心機(jī)儀器有限公司）。

1.2 藥材、藥品與試劑

知母、高良姜、大高良姜、紅豆蔻、草豆蔻、益智飲片 （批號(hào)分別為 150601、160101、170912、160605、170801、 170718）均購自南寧生源中藥飲片有限責(zé)任公司，經(jīng)廣 西中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定學(xué)教研室田慧教授鑒定為真品。 附子理中丸（陽性對(duì)照，北京同仁堂科技發(fā)展股份 有限公司制藥廠，批號(hào)：15010241，規(guī)格：每 100 粒重 10 g）；西咪替丁片（陽性對(duì)照，廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公 司 ，批 號(hào) ：150802，規(guī) 格 ：0.2 g）；17- 羥 皮 質(zhì) 類 固 醇 （17-OHCS）、腎上腺素（A）、去甲腎上腺素（NE）、多巴胺 （DA）、促腎上腺皮質(zhì)素（ACTH）、多巴胺-β-羥化酶 （D-β-H）試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司，批號(hào)分別 為 RA20057、RA20337、RA20557、RA20050、RA20014、 RA20218）；乙醇、乙酸乙酯等試劑均為分析純，水為蒸 餾水。

1.3 動(dòng)物

SPF 級(jí) SD 大鼠，雄性，6～7 周齡，體質(zhì)量 180～220 g，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許 可證號(hào)：SCXK（湘）2013-0004。

2 方法

2.1 藥液的制備

2.1.1 造模藥液

稱取知母飲片適量，用10倍量（g/L， 下同）水充分浸泡 60 min，武火煮沸后轉(zhuǎn)文火煎煮 1 h， 濾過，殘?jiān)?倍量水煎煮40 min，濾過，合并兩次濾液， 濃縮，即得質(zhì)量濃度為0.5 g/mL（以生藥量計(jì)）的知母水 煎液，于4 ℃冰箱中保存，備用；臨用前，用4 ℃水稀釋至 相應(yīng)劑量。取冰醋酸 75 mL，用水稀釋至 500 mL，得 15％冰醋酸溶液，于4 ℃冰箱中保存，備用。

2.1.2 受試藥液

分別取高良姜、大高良姜、紅豆蔻、草 豆蔻、益智飲片適量，粉碎成粗粉，首先用 10 倍量 95％ 乙醇回流提取2 h，濾過，收集濾液；殘?jiān)?倍量95％乙 醇回流提取2 h，濾過，收集濾液；殘?jiān)僖来斡?0、8、8 倍量5％乙醇回流提取3次，每次2 h，濾過，收集濾液；合 并上述濾液，減壓、低溫?fù)]去乙醇，即得到各藥材浸膏 [得率分別為 16.94％、9.97％、12.74％、15.73％、12.39％ （質(zhì)量百分比，下同）]。取上述浸膏，依次用石油醚、乙 酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次5 000 mL，合并相同萃取 部位，減壓濃縮，即得各藥材不同極性萃取部位（即石油 醚、乙酸乙酯、正丁醇、水）浸膏[得率分別為 2.56％、 2.54％、2.15％、4.75％（高良姜），1.58％、5.25％、3.41％、 1.44％（大高良姜），0.27％、6.24％、3.16％、1.04％（紅豆 蔻），2.99％、2.56％、8.18％、2.12％（草豆蔻），2.64％、 3.12％、8.21％、2.13％（益智）]，于 4 ℃冰箱中保存，備 用。臨用前，用 0.5％羧甲基纖維素鈉溶液稀釋至相應(yīng) 劑量。

2.1.3 陽性對(duì)照藥液

取附子理中丸、西咪替丁片各適 量，粉碎，用水溶解后，再用 0.5％羧甲基纖維素鈉溶液 稀釋至相應(yīng)劑量，備用。

2.2 造模、分組與給藥

所有大鼠均適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，隨機(jī)取10只作為空 白組，灌胃等容常溫水；其余大鼠均于每日上午8點(diǎn)灌胃 4 ℃知母水煎液（10.44 g/kg）、下午 18 點(diǎn)灌胃 4 ℃ 15％ 冰醋酸溶液（1 mL），連續(xù)4 d，以復(fù)制胃潰瘍寒證大鼠模 型。造模結(jié)束后，將其隨機(jī)分為模型組、附子理中丸組 （陽性對(duì)照，9.0 g/kg，劑量根據(jù)臨床成人用藥劑量的上限 換算而得）、西咪替丁組（陽性對(duì)照，0.003 3 g/kg，劑量根 據(jù)臨床成人用藥劑量的上限換算而得）以及高良姜、大 高良姜、紅豆蔻、草豆蔻、益智的石油醚、乙酸乙酯、正丁 醇、水萃取部位低、高劑量組[以下簡(jiǎn)稱“高石低/高”“大 石低/高”“紅石低/高”“草石低/高”“益石低/高”“高乙低/ 高”“大乙低/高”“紅乙低/高”“草乙低/高”“益乙低/高”“高正低/高”“大正低/高”“紅正低/高”“草正低/高”“益正 低/高”“高水低/高”“大水低/高”“紅水低/高”“草水低/ 高”“益水低/高”，劑量分別為 0.064/0.256、0.032/0.128、 0.008/0.032、0.075/0.3、0.1/0.4、0.064/0.256、0.108/0.432、 0.16/0.64、0.064/0.25、0.125/0.5、0.056/0.224、0.108/0.432、 0.08/0.32、0.2/0.8、0.3/1.2、0.14/0.56、0.032/0.128、0.028/ 0.112、0.05/0.2、0.087/0.348 g/kg，以萃取部位質(zhì)量計(jì)；劑 量根據(jù)《中華本草》和2015年版《中國藥典》（一部） 規(guī)定 的成人用藥劑量的上限并結(jié)合前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果換算而 得]，每組10只。造模次日，空白組和模型組大鼠均灌胃 等容常溫水，各給藥組大鼠灌胃相應(yīng)藥液，給藥體積均為 2 mL/100 g，每12 h給藥1次，共給藥4次。

3 結(jié)果

與空白組比較，模型組大鼠尿液17-OHCS、A、NE、 DA以及血清ACTH、D-β-H含量均顯著降低，差異均有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組比較，不同給藥組大 鼠尿液17-OHCS（附子理中丸組、西咪替丁組以及高石 低/高、大石高、紅石高、草石高、益石高組）、A（附子理中 丸組、西咪替丁組以及高石高、大石高、紅石低/高、草石 低/高、益石高組）、NE（各給藥組）、DA（除高石低組外的 其余各給藥組）以及血清 ACTH（附子理中丸組以及高 石高、大石高、紅石低/高、草石高、益石低/高組）、D-β-H （附子理中丸組以及高石高、大石高、紅石低/高、益石高 組）含量均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或 P＜0.01）；且大石高組17-OHCS、D-β-H含量，草石高組 ACTH、D-β-H含量以及高石高、益石高組D-β-H含量均 顯著低于紅石高組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01 或 P＜0.05），詳見表1。

與空白組比較，模型組大鼠尿液17-OHCS、A、NE、 DA以及血清ACTH、D-β-H含量均顯著降低，差異均有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組比較，不同給藥組大 鼠尿液17-OHCS（各給藥組）、A（各給藥組）、NE（各給藥 組）、DA（各給藥組）、ACTH（除西咪替丁、大乙低、紅乙 低組外的其余各給藥組）以及血清D-β-H（除西咪替丁、 大乙低、紅乙低、益乙低組外的其余各給藥組），差異均 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；且高乙高、草乙高、 益乙高組DA含量以及高乙高、紅乙高、草乙高、益乙高 組 D-β-H 含量均顯著低于大乙高組，高乙高、草乙高組 DA含量均顯著低于紅乙高組，高乙高、大乙高、草乙高、 益乙高組ACTH含量均顯著高于紅乙高組，差異均有統(tǒng) 計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01)。與空白組比較，模型組大鼠尿液17-OHCS、A、NE、 DA以及血清ACTH、D-β-H含量均顯著降低，差異均有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組比較，不同給藥組大 鼠尿液17-OHCS（附子理中丸、西咪替丁組以及高水高、 大水高、紅水高組）、A（附子理中丸、西咪替丁組以及紅 水高組）、NE（附子理中丸、西咪替丁組以及高水高、大 水高、紅水高組）、DA（附子理中丸、西咪替丁組以及紅 水高組）以及血清 ACTH（附子理中丸組以及大水高 組）、D-β-H（附子理中丸組以及紅水高組）含量均顯著升 高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05 或 P＜0.01）；且草水 高、益水高組 17-OHCS、D-β-H 含量均顯著低于大水高 組；草水高、益水高組17-OHCS、DA、D-β-H含量和高水 高組 DA、D-β-H 含量均顯著低于紅水高組（P＜0.05 或 P＜0.01）。

4 討論

山姜屬為姜科一大屬，全世界約有植物 250 種，主 要分布于亞洲熱帶地區(qū)，我國有 46 種，廣西是主產(chǎn)地 之一。該屬植物藥用歷史悠久，是具有重要臨床應(yīng)用 價(jià)值的常用中藥，也是廣西大宗特產(chǎn)藥材。本課題組前 期研究發(fā)現(xiàn)，高良姜、大高良姜、山姜、艷山姜、益智、紅 豆蔻、草豆蔻、小草蔻、建砂仁、箭桿風(fēng)等山姜屬中藥均 含有γ-杜松烯、γ-萜品烯、芳樟醇、莰烯、石竹素、4-萜烯 醇、1，1，4，8-四甲基-4，7，10-環(huán)十一三烯等揮發(fā)性成分， 并初步推測(cè)上述成分可能也是上述中藥具辛香氣味的 重要物質(zhì)基礎(chǔ)。同時(shí)藥理研究結(jié)果顯示，高良姜、大高 良姜、紅豆蔻、草豆蔻、益智等5味山姜屬中藥石油醚及 乙酸乙酯部位（高劑量）均可通過提高大鼠胃組織中腺 苷環(huán)化酶（AC）、cAMP含量以及cAMP/cGMP，降低PDE 含量等途徑來發(fā)揮對(duì)胃潰瘍寒證模型大鼠的治療作用。本研究在藥用植物親緣關(guān)系的基礎(chǔ)上，以胃潰瘍 寒證模型大鼠為對(duì)象，以附子理中丸、西咪替丁（胃潰瘍 寒證為胃實(shí)寒證，臨床上常以附子理中丸治療胃寒證， 以西咪替丁等治療胃潰瘍）為陽性對(duì)照，初步考察了上 述5味中藥通過調(diào)節(jié)交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)機(jī)能對(duì)模型 大鼠的改善作用。