仙茅為石蒜科植物仙茅 Curculigo orchioides Gaertn． 的干燥根莖，始載于 《雷 公 炮 炙 論》， 其性辛、溫，味苦，有毒，歸肝、腎經(jīng)，具有 補(bǔ)腎助陽(yáng)、益精血、強(qiáng)筋骨、行血消腫的功效?，F(xiàn) 代植物化學(xué)研究表明，仙茅成分比較復(fù)雜，主要包 括酚及酚苷類(lèi)、木脂素類(lèi)、皂苷元及皂苷類(lèi)、黃酮 類(lèi)、桉烷類(lèi)、脂肪族類(lèi)、生物堿類(lèi)、甜味蛋白、多 糖類(lèi)、揮發(fā)油等; 現(xiàn)代藥理研究顯示，仙茅主 要具有抗氧化、抗骨質(zhì)疏松、增強(qiáng)免疫、補(bǔ)腎壯 陽(yáng)、抗炎、抗憂(yōu)郁、抗老年癡呆等作用，臨床 上多用于治療骨質(zhì)疏松癥、乳腺增生、絕經(jīng)后關(guān)節(jié) 炎、更年期綜合征及陽(yáng)痿、再生障礙性貧血、原發(fā) 性高血壓等疾病; 中醫(yī)臨床上常用其炮制品以增強(qiáng) 補(bǔ)益作用。

1 材料

1. 1 儀器

Waters H-Class UPLC 超高效液相色譜 儀 ( 包括四元高壓梯度泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、Empower2 數(shù)據(jù)處理工作站， 美國(guó) Waters 公司) ; 電子天平 ( 瑞士 Mettler-Toledo 公司) ; FA1004B 型電子天平 ( 上海精密科學(xué)儀器有限公司) ; DHG-9140A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 ( 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司) ; DFT-100 型高速萬(wàn)能粉碎機(jī) ( 浙江溫嶺市林大機(jī)械有限公司) 。

1. 2 試藥

仙茅購(gòu)自康美藥業(yè)股份有限公司，經(jīng) 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定室翟延君教授鑒定為石蒜 科植物仙茅 Curculigo orchioides Gaertn． 的 干 燥 根 莖。仙茅苷對(duì)照品 ( 中國(guó)食品藥品檢定研究院， 批號(hào) MUST-15062710，含有量 99. 17%) ; 苔黑 酚 葡萄糖苷對(duì)照品 ( 成都曼思特生物科技有限公司， 批 號(hào) MUST-14041601， 含 有 量 98. 81%) 。 食 鹽 ( 江蘇金橋鹽化集團(tuán)古淮制鹽有限公司，GB5461) ; 甲醇、磷酸、乙腈為色譜純; 其他試劑均為分析 純; 水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2. 1 鹽炙品制備

取適量?jī)粝擅┒?20 g 置適宜容 器內(nèi)，加入鹽水 ( 取 0. 4 g 鹽，以不同鹽水比例拌 勻) 悶潤(rùn)，待鹽水被吸盡后置炒制容器內(nèi)，不同 溫度下不斷翻炒一段時(shí)間，取出，放涼，打 粉， 即得。

2. 2 仙茅苷、苔黑酚葡萄糖苷含有量測(cè)定

2. 2. 1 色譜條件

ACQUITY UHPLC BEH C18 柱 ( 2. 1 mm×50 mm，1. 7 μm) ; 流動(dòng)相乙腈 ( A) - 0. 1%磷酸 ( B) ，梯度洗脫 ( 0 ～ 4 min，3%A; 4 ～ 5 min，5% A; 5 ～ 5. 5 min，7% A; 5. 5 ～ 6 min， 10% A; 6 ～ 8 min，11% A; 8 ～ 8. 5 min，12% A; 8. 5 ～ 9. 5 min，13%A; 9. 5 ～ 10 min，13%A; 10 ～ 13 min，15% A; 13 ～ 15 min，15% A) ; 檢測(cè)波長(zhǎng) 220 nm; 體積流量 0. 3 mL /min; 柱溫30 ℃ ; 進(jìn)樣 量 1 μL。理論板數(shù)按仙茅苷計(jì)算應(yīng)不低于 3 000。 色譜圖見(jiàn)圖 1。

2. 2. 2 對(duì)照品溶液制備

精密稱(chēng)取仙茅苷對(duì)照品 4. 11 mg、苔黑酚葡萄糖苷對(duì)照品 2. 21 mg，置 10 mL量瓶中，甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，稀 釋得到 0. 102 75、0. 110 5 mg /mL 對(duì)照品溶液。

2. 2. 3 供試品溶液制備

稱(chēng)取不同條件下鹽炙品 粉末 ( 過(guò) 3 號(hào)篩) 約 1 g，精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶 中，精密加入甲醇 50 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，加熱回流 2 h，取出，放冷，稱(chēng)定質(zhì)量，甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量， 搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液 20 mL，蒸干，殘?jiān)?加甲醇溶解，移至 10 mL 量瓶中，稀釋至刻度，搖 勻，過(guò) 0. 22 μm 微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

3 討論

為了更準(zhǔn)確地檢出酚苷類(lèi)成分，色譜柱考察了 ACQUITY UHPLC BEH C18 ( 2. 1 mm × 50 mm， 1. 7 μm) 和 Ultimate UHPLC AQ-C18 ( 2. 1 mm × 50 mm，1. 8 μm) ，流動(dòng)相考察了甲醇或乙腈與 0. 1%磷酸或甲酸的不同比例，檢測(cè)波長(zhǎng)考察了 220、280 nm，最終確定為 “2. 2. 1”項(xiàng)下條件。 酚苷類(lèi)是仙茅補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨的物質(zhì)基礎(chǔ)， 故選用其中含有量較高的苔黑酚葡萄糖苷和藥典指 標(biāo)成分仙茅苷作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，并進(jìn)行加權(quán)求和 ( 權(quán)重比例設(shè)為 1 ∶ 1) ，優(yōu)化仙茅鹽炙工藝，具有 一定的科學(xué)性與合理性。仙茅苷和苔黑酚葡萄糖苷 作為仙茅酚苷類(lèi)主要成分，含有量測(cè)定方法有薄層 層析-紫外分光光度法、高效液相色譜法、紫外分光光度法等，本實(shí)驗(yàn)采用UPLC法，與 HPLC 法相比操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好。