巴 戟 天 為 茜 草 科 植 物 巴 戟 天 Ｍｏｒｉｎｄａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓＨｏｗ 的干燥根，是中國著名的“四大南 藥”之 一，始 載 于《神 農(nóng) 本 草 經(jīng)》，味 甘 辛，性 微 溫，具有補(bǔ)腎陽、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕之功效，用于治療陽 痿遺精、宮 冷 不 孕、月 經(jīng) 不 調(diào)、風(fēng) 濕 痹 痛、筋 骨 痿 軟 等。巴戟天藥材中主要含有蒽醌類、環(huán)烯醚 萜 苷 類、多糖類等成分。其中，蒽 醌 類 化 合 物 主 要 有 ２－羥基－１－甲氧基蒽醌、ｒｕｂｉａｓｉｎＡ 和ｒｕｂｉａｓｉｎＢ 等， 均具有 抗 菌、降 壓、降 脂、抗 癌、抗 病 毒、凝 血 等 活 性。環(huán)烯醚萜苷類化合物主要包括水晶蘭 苷、 四乙酰車葉 草 苷等，具有較強(qiáng)的抗炎鎮(zhèn)痛作用。 目前，從巴戟天中分離得到的糖類主要有水溶性多 糖（ＭＯＨＰ－１）、甘露糖、巴戟甲素（原稱巴戟素）、耐 斯糖等多種低聚糖，研究表明其具有顯著的抗抑郁 作用。

１ 主要儀器與試藥

ＳｈｉｍａｄｚｕＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎＬＣ－２０ＡＴ 高 效 液 相 色 譜儀，ＳａｒｔｏｕｉｕｓＣＰＡ２２５Ｄ 分 析 天 平，水 循 環(huán) 真 空 泵，ＳＥＮＣＯＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ．Ｌｔｄ．提供；ＪＭ－Ａ５００２電 子天平，浙江余姚市紀(jì)銘稱重校驗設(shè)備有限公司提 供；DHG-9140A 干燥箱，上海精宏儀器設(shè)備有限公司提供；KQ-500DE超聲波清洗器，江蘇昆山舒美超聲儀器有限公司提供。 耐斯糖對照 品，批 號 為１１１８９１－２０１４０３；水 晶 蘭 苷 對 照 品，批 號 為 １１１８７０－２０１３０３；乙 腈，批 號 為 ２０１６１０１４；甲醇，色譜純，批號為２０１６１０２０；水，純化 水；磷酸，分析純。 巴戟天藥材共計１５批，經(jīng)河北省藥品檢驗研究院孫寶惠老師鑒定為正品，樣品來源信息見表１。

２ 方法與結(jié)果

２．１ 標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品制備

取巴戟天飲片１００ｇ，放入２Ｌ圓底燒瓶中，加水 提取２次。第一煎加水９００ｍＬ，先泡３０ｍｉｎ，然后開 啟加熱，煮沸后計時６０ｍｉｎ；第二煎加水７００ｍＬ，煮 沸后計時４０ｍｉｎ。合并２次煎液，使用孔徑為０．０４８ ｍｍ 的過濾材質(zhì)，在藥液熱時進(jìn)行過濾。將濾液用旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)器于低溫（５５℃，－０．０９５ＭＰａ）濃縮，濃縮至相 對密度為１．０３～１．０６（５５℃）的流浸膏，放置在不銹鋼 盤中冷凍干燥，制成標(biāo)準(zhǔn)湯劑干燥粉末。

２．２ 標(biāo)準(zhǔn)湯劑中耐斯糖含量的測定

２．２．１ 色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相組 成水與甲醇體積比為９７∶３，采用蒸發(fā)光散射檢 測 器 檢 測，理論塔板數(shù)按耐斯糖峰計算應(yīng)不低于 ３０００。

２．２．２ 對照品溶液的制備

取耐斯糖標(biāo)準(zhǔn)品適量，精 密 稱 定，置 于 ５０ ｍＬ 容量瓶中，加入 流 動 相，制 成 每１ ｍＬ 含２００μｇ的溶液。

２．２．３ 供試品溶液的制備

取巴戟天 標(biāo) 準(zhǔn) 湯 劑０．２ｇ，精 密 稱 定，置 于１５０ ｍＬ具塞錐形瓶 中，精 密 加 入 流 動 相５０ ｍＬ，稱 重， 于沸水浴中加熱３０ｍｉｎ，放冷，再次稱重，用流動相 補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，即得。

２．２．４ 測定方法

精密吸 取 對 照 品 溶 液 １０μＬ、對 照 品 溶 液 ３０ μＬ、供試品溶液１０μＬ，注入液相色譜儀，測定，采用 外標(biāo)兩點法對數(shù)方程計算。

２．２．５ 線性關(guān)系考察

精密 吸 取 對 照 品 溶 液 ５．０，１０．０，２０．０，３０．０， ４０．０μＬ，按“２．２．１”所述條件進(jìn)樣分析，縱坐標(biāo)為耐 斯糖峰面積的對數(shù)值，橫坐標(biāo)為耐斯糖進(jìn)樣量的對 數(shù)值，制 作 標(biāo) 準(zhǔn) 曲 線。結(jié) 果 表 明，耐斯糖進(jìn)樣量在 １．０４１９～８．３３４９ ｍｇ 范 圍 內(nèi)，回 歸 方 程 為 Ｙ ＝ １．５８２９Ｘ＋５．５３３×１０－１，ｒ＝０．９９９７，表明線性關(guān) 系良好。

２．２．６ 精密度實驗

取巴戟天標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品（標(biāo)３，下同），按“２．２．３” 所述方法制備供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣６針，測定峰面積（耐斯糖）的 ＲＳＤ 值 為 ０．８７％，結(jié) 果 表 明 精 密 度 良好。

２．２．７ 穩(wěn)定性實驗

取巴戟天標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品，按“２．２．３”所述方法制 備供試品溶液，在１，３，６，１０，１４，１８ｈ進(jìn)樣測定耐斯 糖含量。經(jīng)計算，各樣品中耐斯糖峰面積的 ＲＳＤ 值 為１．５６％，說明１８ｈ內(nèi)此樣品溶液穩(wěn)定。

２．２．８ 重復(fù)性實驗

取巴 戟 天 標(biāo) 準(zhǔn) 湯 劑 樣 品 供 試 品 ６ 份，每 份 ０．２ｇ，精密稱定。按“２．２．３”所述方法處理標(biāo)準(zhǔn)湯劑 樣品，按“２．２．１”所 述 條 件 進(jìn) 樣 測 定，計 算 供 試 品 中 耐斯糖含量。６份供試品中耐斯糖含量的 ＲＳＤ 值 為１．０５％，表明該方法重復(fù)性良好。

２．２．９ 加標(biāo)回收實驗

精密稱取巴戟天標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品，共計９份，每份 約０．１ｇ，每３份為一組。于每組中精密加入耐斯糖 對照 品 相 當(dāng) 于 巴 戟 天 標(biāo) 準(zhǔn) 湯 劑 所 含 耐 斯 糖 量 的 ８０％，１００％，１２０％，置 于 具 塞 錐 形 瓶 中，按“２．２．１” 所述條件進(jìn)樣１０μＬ 進(jìn)行測定，耐斯糖平均加標(biāo)回 收率 為 １００．８０％，加 標(biāo) 回 收 率 ＲＳＤ 值 為 １．５１％。 表明本方法的準(zhǔn)確度良好。

３ 巴戟天標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜的建立

色譜柱：Ａｇｉｌｅｎｔ公司 ＺＯＲＢＡＸＥｃｌｉｐｓｅＰｌｕｓＣ１８ 柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流動相：乙腈－０．０３％磷 酸 溶 液，按 表４比 例 進(jìn) 行 梯 度 洗 脫；檢 測 波 長：２３５ ｎｍ；流速：１ｍＬ／ｍｉｎ；柱溫：３０℃；進(jìn)樣量：１０μＬ。精密 稱 取 水 晶 蘭 苷 對 照 品 １２．５ ｍｇ，置 于 ５０ ｍＬ量瓶中，加入２５％（體積分?jǐn)?shù)，下同）甲醇定容， 制成每１ｍＬ 含水晶蘭苷０．２５ｍｇ的對照 品 溶 液， 即得。取本品０．３ｇ，精 密 稱 定，置于磨口三角瓶中。 精密量取２５％甲醇２５ｍＬ，加入三角瓶中，稱重，密 塞，超聲處理３０ｍｉｎ，放至室溫后再次稱定質(zhì)量，用 ２５％甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，用０．４５μｍ 微孔濾 膜過 濾，即 得。取按“２．１”所 述 方 法 制 得 的 樣 品，按 照“３．３”所 述方法制備樣品溶液，分 別 進(jìn) 樣，按“３．１”色 譜 條 件 測定 ＨＰＬＣ圖譜。測定 完 成 后，把１５批 ＨＰＬＣ 圖 譜導(dǎo) 入 相 似 度 評 價 系 統(tǒng) 軟 件 中 進(jìn) 行 分 析。 １５批巴戟天標(biāo)準(zhǔn)湯劑共呈現(xiàn)７個共有特征峰，以２ 號峰水晶 蘭 苷 為 參 照 峰，計 算 ７ 個 共 有 色 譜 峰 的 ＲＲＴ 及 ＲＰＡ。

４ 討 論

４．１ 提取溶劑

在巴戟天配方標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜樣品的制備方 法中，考察了純化水、無水乙 醇、１００％甲 醇、７０％甲 醇、２５％甲醇、７０％乙醇、２０％乙醇共７種提取溶劑， 以色譜峰個數(shù)、基線穩(wěn)定性等為考察指標(biāo)，最終確定 用２５％甲醇進(jìn)行樣品溶液的制備。

４．２ 流動相

在特征圖譜條件摸索階段，對有機(jī)相考察了甲 醇、乙腈，對 水 相 考 察 了 ０．１％ 磷 酸、０．１％ 冰 醋 酸、 ０．０３％磷酸及水對反應(yīng)的影響情況。通過對比色譜 圖發(fā)現(xiàn)，流動 相 為 乙 腈－０．０３％磷 酸 時，色 譜 圖 基 線 平穩(wěn)，色譜峰 分 離 良 好，因 此 選 用 乙 腈－０．０３％磷 酸 作為流動相。

４．３ 色譜柱及柱溫

考察了ＺＯＲＢＡＸＥｃｌｉｐｓｅＰｌｕｓＣ１８及ＩｎｅｒｔＳｕｓｔａｉｎ ＡＱ－Ｃ１８色譜柱，以 及 柱 溫 為２５，３０，３５ ℃對 反 應(yīng) 的 影響情況。結(jié) 果 顯 示，采 用 ＺＯＲＢＡＸＥｃｌｉｐｓｅＰｌｕｓ Ｃ１８色譜柱、柱溫為３０ ℃時的效果最優(yōu)。

４．４ 提取用純化水、飲用水

先后考察了采用符合《中華人民共和國藥典》要 求的純化水、飲用水提取時的差異情況。從實驗結(jié) 果可以看出，提取效果受提取用水的影響也較小。