紫杉 醇（ＰＴＸ）可以 作 用 于 細(xì) 胞 分 裂 過 程 中 組 成紡錘體的微管蛋白的特定部位從而起到防止其解 聚的作用，在細(xì)胞分裂過程中，不能由微管蛋白迅速 合成紡錘體微 管，使 細(xì) 胞 的 分 裂 永 遠(yuǎn) 停 留 在 Ｇ２和 Ｍ 期，導(dǎo)致其 無 法 復(fù) 制，從而起到殺死癌細(xì)胞的作用。而 ＰＴＸ 的溶解性問題是其制劑的首要問題。另外，ＰＴＸ 作為細(xì)胞毒性的抗腫瘤藥物，因 為缺乏腫瘤靶向性，甚至導(dǎo)致全身性毒性，特別是 中性粒細(xì)胞減少癥等免疫性疾病，這使得其臨床應(yīng) 用受到很大限制。

十八胺、Ｎ，Ｎ 一二甲基甲酰胺、甲酰 胺、Ｎ，Ｎ 一二環(huán)己基 碳 二 亞 胺、ＦＡ、ＨＡ、１－（３－二甲 基丙基）－３－乙基 碳 二 亞 胺 均 購(gòu) 自 麥 克 林；硼 酸 購(gòu) 自 天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司；十水合四硼酸 鈉、二甲亞砜均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司； ＮＨ２－ＰＥＧ２０００－ＣＯＯＨ、透 析袋均購(gòu)自北京索萊寶 科技有限公司；ＰＡＭＡＭ 購(gòu)自威海晨源分子新材料 有限公司。ＳＫＯＶ－３細(xì)胞株及Ｂ１６細(xì)胞株購(gòu)自南昌 樂悠生物科技有限公司；ＰＴＸ 購(gòu)自大連美侖生物技 術(shù)有限公司。

Ｈ－Ｊ磁力加熱攪拌器（鞏義市裕華儀 器有限責(zé)任公司），ＰＨ４００基礎(chǔ)型酸度計(jì)（安萊利斯 有限公司），ＴＹ９６－１１ＩＶ 超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（寧波新藝生物科技葛粉有限公司 ），高 速 冷 凍 離 心 機(jī) （Ｔｈｅｒｍｏ），電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏）， ＧＯＬＤ－ＳＩＭ 冷凍干燥機(jī)（美國(guó)金西盟國(guó)際集團(tuán)），小 動(dòng)物活體成像儀ｃａｐｌｉｐｅｒ（ｌｕｍｉｎａｓｅｒｉｅｓ），激光共聚焦顯微鏡（德國(guó) Ｌｅｉｃａ公司）。

利 用 ＰＡＭＡＭ 的氨基末端與異硫氰酸熒光素的異硫氰 基可以共價(jià)結(jié)合的化學(xué)反應(yīng)，制備熒光標(biāo)記物。稱 取 ＰＡＭＡＭ 適量，溶于 ＰＢＳ緩沖液中（ｐＨ＝７．４）， 緩慢滴加 異 硫 氰 酸 熒 光 素 的 丙 酮 溶 液。摩 爾 比 為 ＰＡＭＡＭ：異硫氰酸熒光素＝１∶１．２。避光 磁 力 攪 拌３６ｈ，透析袋中透析３ｄ，離心除去未反應(yīng)的異硫 氰酸熒光素，凍干得到異硫氰酸熒光素標(biāo)記的 ＰＡ－ ＭＡＮ 聚合物。異硫氰酸熒光素，在４８８ｎｍ 激發(fā)波 長(zhǎng)下，顯示特征綠色熒光。稱取硼砂１．８９５３ｇ、硼酸 １．２３５７ｇ溶于１Ｌ蒸餾水中，得到ｐＨ＝８的緩沖溶 液，避 光 保 存。 將 ＰＡＭＡＭ ２．０７９６ ｇ 和 ＰＥＧ ０．１４１０ｇ溶于２０ｍＬ硼砂－硼酸緩沖液中，室溫，避 光，磁力攪拌１２ｈ。將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至５０Ｋｄ截 留分子量的 超 濾 管 中 超 濾，轉(zhuǎn) 速 為４０００ｒｐｍ／ｍｉｎ， ３０ｍｉｎ／次，共超 濾 ７ 次，收 集 上 層 液 體，凍 干 后 稱 重、密封保存。按參考文獻(xiàn)的方法合成 ＨＡ－Ｃ１８， 并進(jìn)一步合成 ＦＡ－ＨＡ－Ｃ１８，凍干 后 稱 重、密 封 保 存。稱取 ＰＴＸ５０ｍｇ，溶于２．５ｍｌ無水乙醇中，用 無水乙醇溶 解 的 ＰＴＸ 緩慢 滴 加 至 ＦＡ－ＨＡ－Ｃ１８的 溶液中，磁 力 攪 拌 ２４ｈ，冰浴 超 聲 １０ ｍｉｎ，溶液 于 ４０００ｒｐｍ／ｍｉｎ離心 ３０ ｍｉｎ，上清 液 經(jīng) 過 ０．４５μｍ 濾膜，得到 ＦＡ－ＨＡ－ＰＴＸ混合物。在上述混合液中 加入 Ｎ－羥基琥珀酰亞 胺 和１－（３－二甲 氨 基 丙 基）－３－ 乙基 碳 二 亞 胺 鹽 酸 鹽，室 溫 避 光 反 應(yīng) １２ｈ，加 至 ＰＥＧ－ＰＡＭＡＭ 的水溶 液 中。用 鹽 酸 調(diào) 節(jié) ＰＨ 值至 ８．０，室溫避光反應(yīng)１２ｈ。反應(yīng)結(jié)束后，用蒸餾水透 析，離心除雜質(zhì)，凍干后稱重、密封保存。

隨 著 時(shí) 間 的 延 長(zhǎng)，熒 光 標(biāo) 記 載 ＰＴＸ膠束的腫瘤部位熒光蓄積逐漸增多，均顯著高 于對(duì)照組，尤其在１２ｈ時(shí)及２４ｈ時(shí)最多，說明熒光 標(biāo)記載 ＰＴＸ膠束的腫瘤靶向性較好。，載 ＰＴＸ膠束（給藥組）的抑瘤效果 與小分子 ＰＴＸ（陽性 組）類 似，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，給 藥組和陽性組腫瘤的體積逐漸降低，從接種２０ｄ開 始，給藥 組 腫 瘤 體 積 較 陽 性 組 略 有 降 低，說 明 載 ＰＴＸ膠束的抑瘤效果明顯，且略強(qiáng)于小分子 ＰＴＸ。載 ＰＴＸ膠束組小鼠的平均生存時(shí) 間隨著時(shí)間的延長(zhǎng)無明顯變 化，陽 性 組 和 對(duì) 照 組 小 鼠的平均生存時(shí)間逐漸降低，陽 性 組 小 鼠 的 平 均 生存時(shí)間顯著長(zhǎng)于對(duì)照組，說明載 ＰＴＸ 膠束組小鼠的 平均生存時(shí)間明顯長(zhǎng)于對(duì)照組和小分子 ＰＴＸ組。載 ＰＴＸ膠束組小鼠的抑瘤率顯著 強(qiáng)于對(duì)照組，略強(qiáng)于 陽 性 組；載 ＰＴＸ 膠束 組 小 鼠 的 平均生存時(shí)間顯著長(zhǎng)于對(duì)照組及陽性組；載 ＰＴＸ 膠 束組小鼠 的 生 長(zhǎng) 期 延 長(zhǎng) 率 顯 著 高 于 對(duì) 照 組 及 陽 性 組。

惡性腫瘤已經(jīng)成為影響人類健康的主要疾病之 一，據(jù)統(tǒng)計(jì)，２０１０年有超過１２００萬人被確診患上癌 癥，有７６０萬病 人 死 于 各 種 癌 癥。我 國(guó) 流 行 病 學(xué) 調(diào) 查顯示，惡性腫瘤的死亡率居城市和農(nóng)村全部死亡 病例之首，并有明顯上升趨勢(shì)。如今，惡性腫瘤的治 療方法中，化療是主要方法之一，但化療藥物又 存在缺乏靶向性和毒副作用大的缺陷。所以設(shè)計(jì)構(gòu) 建毒副作用小，靶向性高的抗腫瘤靶向載體系統(tǒng)具 有很好的藥學(xué)研究前景。分子物質(zhì)和脂質(zhì)在腫瘤組織透過性增強(qiáng)及滯留 效應(yīng) 稱 作 實(shí) 體 瘤 的 高 通 透 性 和 滯 留 效 應(yīng) （ＥＰＲ），ＥＰＲ效應(yīng)促進(jìn)了大分子類物質(zhì)在腫瘤 組織的選擇性分布，可以增加 藥 效 并 減 少 系 統(tǒng) 副 作 用，本研究基于 ＥＰＲ 效應(yīng)原理，將高分子聚合物與 小分子化療藥物的偶聯(lián)物，通 過 藥 劑 學(xué) 手 段 結(jié) 合 到 高分子材料表面，有效地緩解 了 傳 統(tǒng) 納 米 粒 的 突 釋 效應(yīng)，因而具有獨(dú)特 的 優(yōu) 勢(shì)。并 且 通 過 雙 靶 向 載 藥 系統(tǒng)設(shè)計(jì)進(jìn)一步提高 ＰＴＸ抗腫瘤作用，并改善其毒 副作用。本研究中采用了 ＦＡ 和 ＨＡ 作為腫瘤靶向 基團(tuán)，對(duì) ＰＴＸ－ＰＡＭＡＭ 進(jìn)行了雙靶向的修飾，并組 裝成膠束進(jìn)行了體內(nèi)評(píng)價(jià)。



 

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